Salvo
Kayıtlı Üye
Giriş
Bacillus cereus, insan patojeni olmak yanında salgıladığı proteaz enzimi ile özellikle UHT sütlerde sorun çıkaran bir bakteridir (1). Buna bağlı olarak gıda mikrobiyolojisi laboratuvarlarında sayım ya da arama şeklinde analizi yapılır.
Bu derlemede Bacillus cereus 'un standart analiz yöntemleri ve kullanılan besiyerleri kıyaslamalı olarak verilmiştir.
Selektif Besiyerine Ekim ve İzolasyon
İşletme laboratuvarlarında B. cereus 'un rutin analizleri için Cereus Selective Agar; MYP (Mannitol Egg Yolk Polymyxin) Agar ve Bacillus cereus Selective Agar; PEMBA (Polymyxin Egg Yolk Mannitol Bromthymol Blue Agar) olmak üzere iki ticari seçici besiyeri yaygın olarak kullanılmaktadır (2).
Çiğ sütlerden genellikle 102 ile 106 arasında hazırlanan seri dilüsyonlardan MYP Agar besiyerine ekim yapılarak 30-35 oC'de 18-24 saat inkübasyona bırakılır veya PEMBA'da 37 oC'de 24 saat inkübasyon ve ardından da oda sıcaklığında 24 saat bekletme yapılır. MYP besiyeri, B. cereus 'un lesitinaz aktivitesi ve mannitol fermantasyonu olmak üzere iki tipik reaksiyonu belirlemek üzere geliştirilmiştir (3).
B. cereus sayısının az olduğu tahmin edilen sıvı gıdalarda doğrudan, katı veya yarı katı gıdalarda ise 101 dilüsyonlardan ekim yapılır. Böyle ürünlerde bakteriyi saptama oranını artırmak için 140 mm çaplı büyük Petri kutularına 1 ml inokülüm aktarılarak da ekim yapılır (2).
B. cereus, mannitol negatif olduğu için MYP Agar besiyerinde pembe koloniler oluştururken, lesitinaz aktivitesi nedeni ile de koloni etrafında presipitasyon (çökelme) halkası oluşumuna neden olur. Ancak bu besiyerinde bazı dezavantajlar da vardır. İncelenecek gıda maddesinde mannitolü fermente ederek asit oluşturabilen farklı mikroorganizma grupları mevcut ise, B. cereus kolonilerinin karakteristik pembe renkleri azalır veya tamamıyla kaybolur. Bazı Bacillus türleri, çok az lesitinaz üretir veya hiç üretmezler. Bu türlere ait kolonilerin etrafında presipitasyon halkası gözlenmez (4).
Bacillus cereus, PEMBA üzerinde pürüzlü, mumsu, turkuaz mavimsi renkte koloniler oluşturur. Bu koloniler lesitinaz aktivitesine bağlı olarak aynı renkli bir presipitasyon halkası ile çevrilidir (2).
En düşük dilüsyondan ekim yapılmış olan Petri kutularındaki karakteristik koloni sayısı 15'den az olarak tahmin ediliyor ise EMS yöntemi kullanılarak da sayım yapılabilir. Bu amaçla FDA (Food and Drug Administration) tarafından belirtilen yönteme göre Tripticase Soy Polymyxin Broth içeren tüplere inokülasyon yapılarak, 30 oC'de 48 saat inkübasyona bırakılır. B. cereus için tipik olan yoğun gelişme gözlenir. Pozitif tüplerden MYP Agar besiyerine alınarak, 30 oC'de 24-48 saat inkübe edilir. Burada oluşan tipik koloniler B. cereus doğrulaması için Nutrient Yatık Agar besiyerine alınarak biyokimyasal testlere geçilir (4).
Bacillus cereus, insan patojeni olmak yanında salgıladığı proteaz enzimi ile özellikle UHT sütlerde sorun çıkaran bir bakteridir (1). Buna bağlı olarak gıda mikrobiyolojisi laboratuvarlarında sayım ya da arama şeklinde analizi yapılır.
Bu derlemede Bacillus cereus 'un standart analiz yöntemleri ve kullanılan besiyerleri kıyaslamalı olarak verilmiştir.
Selektif Besiyerine Ekim ve İzolasyon
İşletme laboratuvarlarında B. cereus 'un rutin analizleri için Cereus Selective Agar; MYP (Mannitol Egg Yolk Polymyxin) Agar ve Bacillus cereus Selective Agar; PEMBA (Polymyxin Egg Yolk Mannitol Bromthymol Blue Agar) olmak üzere iki ticari seçici besiyeri yaygın olarak kullanılmaktadır (2).
Çiğ sütlerden genellikle 102 ile 106 arasında hazırlanan seri dilüsyonlardan MYP Agar besiyerine ekim yapılarak 30-35 oC'de 18-24 saat inkübasyona bırakılır veya PEMBA'da 37 oC'de 24 saat inkübasyon ve ardından da oda sıcaklığında 24 saat bekletme yapılır. MYP besiyeri, B. cereus 'un lesitinaz aktivitesi ve mannitol fermantasyonu olmak üzere iki tipik reaksiyonu belirlemek üzere geliştirilmiştir (3).
B. cereus sayısının az olduğu tahmin edilen sıvı gıdalarda doğrudan, katı veya yarı katı gıdalarda ise 101 dilüsyonlardan ekim yapılır. Böyle ürünlerde bakteriyi saptama oranını artırmak için 140 mm çaplı büyük Petri kutularına 1 ml inokülüm aktarılarak da ekim yapılır (2).
B. cereus, mannitol negatif olduğu için MYP Agar besiyerinde pembe koloniler oluştururken, lesitinaz aktivitesi nedeni ile de koloni etrafında presipitasyon (çökelme) halkası oluşumuna neden olur. Ancak bu besiyerinde bazı dezavantajlar da vardır. İncelenecek gıda maddesinde mannitolü fermente ederek asit oluşturabilen farklı mikroorganizma grupları mevcut ise, B. cereus kolonilerinin karakteristik pembe renkleri azalır veya tamamıyla kaybolur. Bazı Bacillus türleri, çok az lesitinaz üretir veya hiç üretmezler. Bu türlere ait kolonilerin etrafında presipitasyon halkası gözlenmez (4).
Bacillus cereus, PEMBA üzerinde pürüzlü, mumsu, turkuaz mavimsi renkte koloniler oluşturur. Bu koloniler lesitinaz aktivitesine bağlı olarak aynı renkli bir presipitasyon halkası ile çevrilidir (2).
En düşük dilüsyondan ekim yapılmış olan Petri kutularındaki karakteristik koloni sayısı 15'den az olarak tahmin ediliyor ise EMS yöntemi kullanılarak da sayım yapılabilir. Bu amaçla FDA (Food and Drug Administration) tarafından belirtilen yönteme göre Tripticase Soy Polymyxin Broth içeren tüplere inokülasyon yapılarak, 30 oC'de 48 saat inkübasyona bırakılır. B. cereus için tipik olan yoğun gelişme gözlenir. Pozitif tüplerden MYP Agar besiyerine alınarak, 30 oC'de 24-48 saat inkübe edilir. Burada oluşan tipik koloniler B. cereus doğrulaması için Nutrient Yatık Agar besiyerine alınarak biyokimyasal testlere geçilir (4).